肺癌是导致全球癌症死亡的最常见原因，而非小细胞肺癌（NSCLC）约占肺癌诊断患者的85%，尽管新的治疗策略，如靶向治疗、免疫疗法、联合化疗和免疫治疗已经发展起来 [1-3]，但NSCLC患者的5年生存率仍然很低，因此，对于晚期NSCLC患者，亟需新的方法来解决这一问题。
近年来，已有诸多研究发现，未接受治疗的I/II期原发性NSCLC肿瘤含有很高比例的肿瘤反应性T细胞，这些细胞可以有效地扩增并用于产生自体TILs，对于靶向治疗NSCLC的意义重大[4-6]。
而最近发表在Immuno-Oncology and Technology上的一项研究表明，转移性NSCLC患者TILs的总数和组成与早期原发性NSCLC肿瘤基本一致。研究者将转移部位不同和经过不同治疗方法的NSCLC患者体内的TILs扩增到与TILs输血相容的数量，发现检测到的21种TIL中有16种（76%）显示出抗肿瘤活性，其中几个含有多功能T细胞[7]。
该研究使用流式细胞术研究了27位转移部位不同以及治疗方案不同的NSCLC患者淋巴细胞的组成（表1）。方法是用含有5%人血清（健康）、5%胎牛血清、50 μg/mL庆大霉素、1 μg/mL两性霉素B和6000IU人重组IL-2的培养基，在37°C和5% CO2下扩增TILs，并测量了它们产生的关键促炎细胞因子IFN-γ、TNF、IL-2以及在扩增TILs与自体肿瘤消化共培养后表达CD137的能力。
表1
研究结果表明：
1、转移性NSCLC患者是转移部位也含有大量的TILs，随后测量其淋巴细胞组成，发现除了晚期NSCLC的肿瘤常规CD4+T细胞浸润比例降低外，早期和晚期肿瘤淋巴细胞浸润程度基本相同（图1）。
图1
2、转移性NSCLC患者的转移部位含有记忆和组织驻留特征的T细胞，T细胞记忆是T细胞功能的重要指标。组织驻留记忆T细胞（TRM) 是一个特殊的TIL亚群，能够无限期地驻留在组织中，并快速对其同源抗原作出免疫反应。CD103是TRM细胞的识别标志，CD69是T细胞活化的标志。结果显示，晚期转移性NSCLC患者的TILs效应记忆细胞(Tem)减少，组织驻留特征增加（图2）。
图2
3、为了进一步确定在晚期NSCLC患者体内TILs的适应性，该研究测量了几种耗竭和激活标志物。这包括PD-1（一种与TIL功能失调状态相关的标志物）、CD39标记激活和耗竭的T细胞。当与组织驻留标记CD69和CD103结合使用时，CD39可识别浸润人体实体瘤的T细胞。随后又研究了共刺激分子CD137（4-1BB），其主要存在于肿瘤反应性T细胞中。结果显示，TIL上的组织驻留标志物以及CD39和CD137的表达增加，表明肿瘤反应性T细胞确实存在于转移性NSCLC中（图2）。
此外，研究者对TIL进行了扩增，并检测扩增结束时T细胞的含量，发现扩增的TIL主要由CD4+和CD8+ T细胞组成（图3）。
图3
4、为了研究从转移性NSCLC病变组织中扩增出来的TIL的功能，研究者测量了它们在佛波酯(PMA)和离子霉素激活6小时后产生TNF、IFN-γ或IL-2的总体能力。一些扩增的TIL能够产生一种高水平的特定细胞因子，但大多数产生两种或更多(图4)，这充分揭示了它们有产生细胞因子的能力。
图4
5、为了确定TILs的肿瘤反应性，该研究将扩增的TIL与自体肿瘤细胞反应6小时，使用培养基作为阴性对照，测量了TNF、IFN-γ、IL-2的产生和CD137的表达。为了将扩增的TIL与肿瘤浸润T细胞区分，该研究在共培养之前用CD4和CD8抗体对扩增的TIL进行了预染色。结果表明，肿瘤反应性TIL的水平不能归因于转移部位或预处理方式（图5）。
图5
综上可知，无论NSCLC转移于哪个部位或治疗前的方案如何，都是可以产生肿瘤反应性TIL的，这同样也是TIL产品的可行来源。
参考文献：
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[6]Hashemi S, Fransen MF, Niemeijer A, Ben Taleb N, Houda I, Veltman J, Becker-Commissaris A, Daniels H, Crombag L, Radonic T, Jongeneel G, Tarasevych S, Looysen E, van Laren M, Tiemessen M, van Diepen V, Maassen-van den Brink K, Thunnissen E, Bahce I. Surprising impact of stromal TIL's on immunotherapy efficacy in a real-world lung cancer study. Lung Cancer. 2021 Mar;153:81-89.
[7]Castenmiller SM, de Groot R, Guislain A, Monkhorst K, Hartemink KJ, Veenhof AAFA, Smit EF, Haanen JBAG, Wolkers MC. Effective generation of tumor-infiltrating lymphocyte products from metastatic non-small-cell lung cancer (NSCLC) lesions irrespective of location and previous treatments. Immunooncol Technol. 2022 Jun 22;15:100090.
